Мікроскопічні методи дослідження

методи вивчення різних об'єктів за допомогою мікроскопа. У біології та медицині ці методи дозволяють вивчати будову мікроскопічних об'єктів, розміри яких лежать за межами роздільної здатності ока людини. Основу М.М.І. складає світлова та електронна мікроскопія. У практичній та науковій діяльності лікарі різних спеціальностей — вірусологи, мікробіологи, цитологи, морфологи, гематологи та ін. У цих методів лежать різні властивості світла. p align="justify"> При електронній мікроскопії зображення об'єктів дослідження виникає за рахунок спрямованого потоку електронів.

Для світлової мікроскопії та заснованих на ній інших М.м.і. визначальне значення крім роздільної здатності Мікроскопа має характер і спрямованість світлового променя, а також особливості об'єкта, що вивчається, який може бути прозорим і непрозорим. Залежно від властивостей об'єкта змінюються фізичні властивості світла — його колір та яскравість, пов'язані з довжиною та амплітудою хвилі, фаза, площина та напрямок поширення хвилі. На використанні цих властивостей світла і будуються різні М.М. Для світлової мікроскопії біологічні об'єкти зазвичай фарбують з метою виявлення тих чи інших їх властивостей.рис. 1). У цьому тканини би мало бути фіксовані, т.к. забарвлення виявляє певні структури лише убитих клітин. У живій клітині барвник відокремлюється у цитоплазмі як вакуолі і не фарбує її структури.Однак у світловому мікроскопі можна вивчати живі біологічні об'єкти за допомогою методу вітальної мікроскопії. У цьому випадку застосовують темнопольний конденсор, який вбудовують у мікроскоп.

Для дослідження живих та незабарвлених біологічних об'єктів використовують також фазово-контрастну мікроскопію. Вона полягає в дифракції променя світла залежно від особливостей об'єкта випромінювання. При цьому змінюється довжина та фаза світлової хвилі. Об'єктив спеціального фазово-контрастного мікроскопа містить напівпрозору фазову пластинку. Живі мікроскопічні об'єкти або фіксовані, але не забарвлені мікроорганізми і клітини через їх прозорість практично не змінюють амплітуду і колір світлового променя, що проходить через них. викликаючи лише зрушення фази його хвилі. Однак, пройшовши через об'єкт, що вивчається, промені світла відхиляються від напівпрозорої фазової пластинки. В результаті між променями, що пройшли через об'єкт, та променями світлового фону виникає різниця довжини хвилі. Якщо ця різниця становить не менше 1/₄ довжини хвилі, то з'являється зоровий ефект, при якому темний об'єкт виразно видно на світлому фоні або навпаки, залежно від особливостей фазової пластинки.

Різновидом фазово-контрастної мікроскопії є амплітудно-контрастна, або аноптральна, мікроскопія, при якій застосовують об'єктив зі спеціальними пластинками, що змінюють лише яскравість та колір фонового світла. В результаті розширюються можливості дослідження живих незабарвлених об'єктів.Фазово-контрастна мікроскопія знаходить застосування в мікробіології та паразитології при дослідженні мікроорганізмів, найпростіших клітин рослин і тварин; в гематології для підрахунку та визначення диференціювання клітин кісткового мозку та крові; а також при вивченні клітин культури тканин тощо.

Інтерференційна мікроскопія вирішує самі завдання, як і фазово-контрастная. Але якщо остання дозволяє спостерігати лише контури об'єктів дослідження, то за допомогою інтерференційної мікроскопії можна вивчати деталі прозорого об'єкта та проводити їх кількісний аналіз. Це досягається завдяки роздвоєнню променя світла в мікроскопі: один з променів проходить через частинку об'єкта, що спостерігається, а інший повз неї. В окулярі мікроскопа обидва промені з'єднуються та інтерферують між собою. Виникає різницю фаз можна виміряти, визначивши т. о. масу різних клітинних структур. Послідовний вимір різниці фаз світла з відомими показниками заломлення дає можливість визначати товщину живих об'єктів і нефіксованих тканин, концентрацію в них води та сухої речовини, вміст білків тощо. На підставі даних інтерференційної мікроскопії можна побічно судити про проникність мембран, активність ферментів, клітинний метаболізм об'єктів дослідження.

Поляризаційна мікроскопія дозволяє вивчати об'єкти дослідження у світлі, утвореному двома променями, поляризованими у взаємноперпендикулярних площинах, тобто. у поляризованому світлі. Для цього використовують плівчасті поляроїди або призми Ніколя, які поміщають у мікроскопі між джерелом світла та препаратом. Поляризація змінюється при проходженні (або відбитті) променів світла через різні структурні компоненти клітин та тканин, властивості яких неоднорідні.У так званих ізотропних структурах швидкість поширення поляризованого світла не залежить від площини поляризації, в анізотропних структурах швидкість його поширення змінюється в залежності від напрямку світла по поздовжній або поперечній осі об'єкта. Якщо показник заломлення світла вздовж структури більше, ніж у поперечному напрямку, виникає позитивне подвійне променезаломлення, при зворотних взаєминах - негативне подвійне променезаломлення. Багато біологічних об'єктів мають сувору молекулярну орієнтацію, є анізотропними і мають позитивне подвійне заломлення світла. Такими властивостями володіють міофібрили, вії миготливого епітелію, нейрофібрили, колагенові волокна та ін. Зіставлення характеру заломлення променів поляризованого світла та величини анізотропії об'єкта дозволяє судити про молекулярну організацію його структури (рис. 2). Поляризаційна мікроскопія є одним із гістологічних методів дослідження (Гістологічні методи дослідження), способом мікробіологічної діагностики (Мікробіологічна діагностика), знаходить застосування у цитологічних дослідженнях (Цитологічне дослідження) та ін. При цьому в поляризованому світлі можна досліджувати як пофарбовані, так і незабарвлені та нефіксовані, так звані нативні препарати зрізів тканин.

Широке поширення має люмінесцентна мікроскопія. Вона заснована на властивості деяких речовин давати свічення - люмінесценцію в УФ-променях або синьо-фіолетової частини спектру. Багато біологічних речовин, такі як прості білки, коферменти, деякі вітаміни і лікарські засоби, мають власну (первинну) люмінесценцію.Інші речовини починають світитися лише при додаванні до них спеціальних барвників – флюорохромів (вторинна люмінесценція). Флюорохроми можуть розподілятися у клітині дифузно чи вибірково забарвлюють окремі клітинні структури чи певні хімічні сполуки біологічного об'єкта. На цьому засновано використання люмінесцентної мікроскопії при цитологічних та гістохімічних дослідженнях (див. Гістохімічні методи дослідження). За допомогою імунофлюоресценції в люмінесцентному мікроскопі виявляють вірусні антигени та їх концентрацію у клітинах, ідентифікують віруси, визначають антигени та антитіла, гормони, різні продукти метаболізму тощо. (рис. 3). У зв'язку з цим люмінесцентну мікроскопію застосовують в лабораторній діагностиці таких інфекцій, як герпес, епідемічний паротит, вірусний гепатит, грип та ін. . У патоморфології за допомогою люмінесцентної мікроскопії розпізнають злоякісні пухлини в гістологічних та цитологічних препаратах, визначають ділянки ішемії м'язів серця при ранніх термінах інфаркту міокарда, виявляють амілоїд у біоптатах тканин тощо.

Ультрафіолетова мікроскопія заснована на здатності деяких речовин, що входять до складу живих клітин, мікроорганізмів або фіксованих, але не забарвлених, прозорих у видимому світлі тканин, поглинати УФ-випромінювання з певною довжиною хвиль (400-250) нм). Цією властивістю мають високомолекулярні сполуки, такі як нуклеїнові кислоти, білки, ароматичні кислоти (тирозин, триптофан, метилаланії), пуринові та пірамідинові основи та ін.За допомогою ультрафіолетової мікроскопії уточнюють локалізацію та кількість зазначених речовин, а у разі дослідження живих об'єктів – їх зміни у процесі життєдіяльності.

Інфрачервона мікроскопія дозволяє досліджувати непрозорі для видимого світла та УФ-випромінювання об'єкти шляхом поглинання їх структурами світла з довжиною хвилі 750-1200 нм. Для інфрачервоної мікроскопії не потрібно попередньої хімічної обробки препаратів. Цей вид М.М.І. найчастіше використовують у зоології, антропології, інших галузях біології. У медицині інфрачервону мікроскопію застосовують в основному в нейроморфології та офтальмології.

Для вивчення об'ємних об'єктів використовують стереоскопічну мікроскопію. Конструкція стереоскопічних мікроскопів дозволяє бачити об'єкт дослідження правим та лівим оком під різними кутами. Досліджують непрозорі об'єкти за відносно невеликого збільшення (до 120 разів). Стереоскопічна мікроскопія знаходить застосування у мікрохірургії (Мікрохірургія), у патоморфології при спеціальному вивченні біопсійного, операційного та секційного матеріалу; у судово-медичних лабораторних дослідженнях.

Для вивчення на субклітинному та макромолекулярному рівнях структури клітин, тканин мікроорганізмів та вірусів використовують електронну мікроскопію. Цей М.М.І. дозволив перейти на якісно новий рівень вивчення матерії. Він знайшов широке застосування в морфології, мікробіології, вірусології, біохімії, онкології, генетиці, імунології, різке підвищення роздільної здатності електронного мікроскопа забезпечується потоком електронів, що проходять у вакуумі через електромагнітні поля, створювані електромагнітними лінзами.Електрони можуть проходити через структури об'єкта, що досліджується (трансмісійна електронна мікроскопія) або відбиватися від них (скануюча електронна мікроскопія), відхиляючись під різними кутами, в результаті чого виникає зображення на люмінесцентному екрані мікроскопа. При трансмісійній (просвічує) електронній мікроскопії отримують площинне зображення структур (рис. 4), при скануючій - об'ємне (рис. 5). Поєднання електронної мікроскопії з іншими методами, наприклад, з радіоавтографією, гістохімічними, імунологічними методами дослідження (Імунологічні методи дослідження), дозволяє проводити електронно-радіоавтографічні, електронно-гістохімічні, електронно-імунологічні дослідження.

Електронна мікроскопія потребує спеціальної підготовки об'єктів дослідження, зокрема хімічної чи фізичної фіксації тканин та мікроорганізмів. Біопсійний матеріал і секційний матеріал після фіксації зневоднюють, заливають в епоксидні смоли, ріжуть скляними або алмазними ножами на спеціальних ультратомах, що дозволяють отримувати ультратонкі зрізи тканин завтовшки 30-50 нм. Їх контрастують і вивчають в електронному мікроскопі. У сканувальному (растровому) електронному мікроскопі вивчають поверхню різних об'єктів, напилюючи на них у вакуумній камері електронно-щільні речовини, і досліджують так звані репліки, що повторюють контури зразка. також Мікроскоп.

Мал. 2б). Мікропрепарат міокарда в поляризованому світлі при раптовій смерті від гострої коронарної недостатності – виявляються ділянки, у яких відсутня характерна поперечна смугастість кардіоміоцитів; ×400.

На чому ґрунтується метод дослідження мікроскопія?

Мікроскопічні методи дослідження – способи вивчення різних об'єктів за допомогою мікроскопа. У біології та медицині цими методами вивчають будову мікроскопічних об'єктів, розміри яких лежать за межами роздільної здатності ока людини. Основу мікроскопічних методів дослідження складають СМ та ЕМ. СМ має кілька різновидів, кожен з яких використовує різні властивості світла: фазово-контрастна, інтерференційна, люмінесцентна, поляризаційна, стереоскопічна, ультрафіолетова, інфрачервона. У ЕМ зображення об'єктів дослідження виникає внаслідок спрямованого потоку електронів.

Світлова мікроскопія

СМ ґрунтується на таких визначальних факторах, як роздільна здатність мікроскопа, спрямованість світлового променя, а також особливості об'єкта, що вивчається, який може бути прозорим і непрозорим. Залежно від властивостей об'єкта змінюються фізичні властивості світла - його колір та яскравість, пов'язані з довжиною та амплітудою хвилі, фаза, площина та напрямок поширення хвилі. Для СМ біологічні об'єкти зазвичай забарвлюють виявлення тих чи інших властивостей. При цьому тканини повинні бути фіксовані, тому що забарвлення виявляє певні структури лише загиблих клітин. У живій клітині барвник відокремлюється у цитоплазмі як вакуолі і не фарбує клітинні структури. Проте у СМ можна вивчати і живі біологічні об'єкти (вітальна мікроскопія). У цьому випадку застосовують конденсор темнопольний.

Фазово-контрастна мікроскопія застосовується для дослідження живих та незабарвлених біологічних об'єктів. Вона полягає в дифракції променя світла залежно від особливостей об'єкта вивчення, яких залежить зміна довжини і фази світлової хвилі.У патології фазово-контрастная мікроскопія знаходить застосування щодо простих, клітин рослин і тварин, під час підрахунку і диференціювання клітин кісткового мозку і периферичної крові, щодо клітин культури тканин та інших.

Поляризаційна мікроскопія дозволяє вивчати біологічні об'єкти у світлі, утвореному двома променями, поляризованими у взаємно перпендикулярних площинах, тобто. у поляризованому світлі. Цього досягають за допомогою плівчастих поляроїдів або призм Ніколя, які поміщають у мікроскопі між джерелом світла та препаратом. Поляризація змінюється при проходженні (або відбитті) променів світла через різні та оптично різнорідні структури. У про ізотропних структурах швидкість поширення поляризованого світла залежить від площині поляризації, а анізотропних структурах швидкість його поширення змінюється залежно від напрями світла по поздовжньої чи поперечної осі об'єкта. Якщо показник заломлення світла вздовж структури більше, ніж у поперечному напрямку, виникає позитивне подвійне променезаломлення, при зворотних взаєминах - негативне подвійне променезаломлення. Багато біологічних об'єктів мають строгу молекулярну орієнтацію, є анізотропними і мають позитивне подвійне променезаломлення. Такі властивості мають міофібрили, вії миготливого епітелію, колагенові волокна та ін. Зіставлення характеру променезаломлення поляризованого світла та величини анізотропії об'єкта дозволяє судити про молекулярну організацію його структури. Поляризаційна мікроскопія є одним із гістологічних, а також цитологічних методів дослідження, способом мікробіологічної діагностики та ін.Важливо, що у поляризованому світлі можна досліджувати як пофарбовані, і незабарвлені і нефіксовані (нативні) зрізи тканин.

Люмінесцентна мікроскопія заснована на властивості багатьох речовин давати світіння - люмінесценцію в УФ-променях або в синьо-фіолетовій частині спектра світла. Ряд біологічних речовин, таких як прості білки, коферменти, деякі вітаміни, лікарські засоби (ЛЗ) мають власну (первинну) люмінесценцію. Інші речовини починають світитися при додаванні до них спеціальних барвників - флюорохром (вторинна люмінесценція). Флюорохроми можуть розподілятися у клітині дифузно, але можуть вибірково забарвлювати окремі клітинні структури чи певні хімічні сполуки. На цьому засновано використання люмінесцентної мікроскопії у цитологічних та гістохімічних дослідженнях. Імунофлюоресценція в люмінесцентному мікроскопі дозволяє виявляти різні Аг та їх концентрацію в клітинах, при цьому можлива ідентифікація вірусів, визначення AT та імунних комплексів, гормонів, різних продуктів метаболізму та ін. пухлини в гістологічних та цитологічних препаратах, визначають осередки ішемії м'яза серця при ранніх термінах інфаркту міокарда, виявляють амілоїд у біоптатах тканин тощо. буд.

Ультрафіолетова та інфрачервона мікроскопія заснована на здатності поглинання УФ та інфрачервоних променів певних довжин хвиль деякими речовинами, що входять до складу живих клітин, мікроорганізмів або фіксованих, але не забарвлених тканин, прозорих у видимому світлі.Властивістю поглинати УФ-промені мають високомолекулярні сполуки, такі як нуклеїнові кислоти, білки, ароматичні амінокислоти (тирозин, триптофан, метилалаланін), пуринові та піримідинові основи та ін. За допомогою УФ-мікроскопії вивчають локалізацію та кількість таких речовин, а при дослідженні - їх зміни у процесі життєдіяльності. Інфрачервона мікроскопія застосовується в медицині переважно в нейроморфології та офтальмології.

Для спеціальних цілей у патології використовуються інші мікроскопічні методи - інтерференційна, стереоскопічна мікроскопія та ін.

Електронна мікроскопія

ЕМ застосовують для вивчення структури клітин, мікроорганізмів та вірусів на субклітинному та макромолекулярному рівнях. Значну роздільну здатність ЕМ забезпечує потік електронів, що проходять у вакуумі через електромагнітні поля, створювані електромагнітними лінзами. При трансмісійній ЕМ електрони проходять через структури об'єкта, що досліджується, а при скануючій ЕМ вони відбиваються від цих структур, відхиляючись під різними кутами. В результаті виникає зображення на люмінесцентному екрані мікроскопа. При трансмісійній (просвічує) ЕМ отримують площинне зображення внутрішньоклітинних структур, при скануючій - об'ємне. Дуже корисним є поєднання ЕМ з іншими методами - авторадіографією, гістохімічними, імунологічними методами. Виникає можливість спостерігати перебіг біохімічних та імунологічних процесів у клітині у поєднанні із змінами внутрішньоклітинних структур. ЕМ вимагає спеціальної хімічної чи фізичної фіксації тканин. Для дослідження беруть переважно біопсійний матеріал. Може бути використаний і секційний матеріал, але в максимально короткі терміни після смерті, які зазвичай обчислюються хвилинами.Після фіксації тканини зневоднюють, заливають у епоксидні смоли, ріжуть скляними чи алмазними ножами на ультратомах. При цьому отримують ультратонкі зрізи тканин товщиною 30-50 нм. Їх контрастують, переносять на спеціальні металеві сітки, а потім вивчають в ЕМ.

При ультратомуванні препарату можна отримати так звані напівтонкі зрізи завтовшки 1,5 мкм, які після фарбування метиленовим синім досліджують у СМ. Це дозволяє отримати уявлення про стан тієї тканини, клітини якої потім будуть вивчені в ЕМ. Метод може мати самостійне значення.

У сканувальному (растровому) ЕМ досліджують поверхню біологічних і небіологічних об'єктів, напилюючи у вакуумній камері на їх поверхню електроноплотні речовини та вивчаючи ці репліки, що повторюють контури об'єкта дослідження.

Методи мікроскопії

Мікроскопія - Це дослідження об'єктів за допомогою спеціальних збільшувальних приладів - мікроскопів.

Для отримання збільшених зображень в мікроскопах використовують квантове випромінювання різного виду (видимого діапазону, ультрафіолетове або рентгенівське), що проходить або відображене від об'єкта, а також потоки елементарних частинок (потік електронів). Тому є кілька різновидів мікроскопічного методу: світлова, ультрафіолетова, рентгенівська, електронна мікроскопії. Найбільш поширені в цитології та гістології світлова та електронна мікроскопії.

p align="justify"> Методи мікроскопування дозволяють спостерігати і вивчати тільки такі об'єкти або їх структури, розміри яких перевищують половину довжини хвилі випромінювання, що використовується в конкретному методі. Таким чином, основною характеристикою будь-якого мікроскопа є значення його граничної роздільної здатності відстані d (роздільна здатність, або роздільна здатність).

Роздільна здатність - це найменша відстань між двома точками об'єкта, при якому вони видно окремо; мінімальний розмір об'єкта, у якому мікроскоп ще «дозволяє» розглянути деталі зображення.

Теоретично гранична роздільна здатність виражається формулою, з якої випливає, що чим коротша довжина хвилі випромінювання, що використовується в мікроскопі, тим вище його роздільна здатність і, отже, більше максимальне збільшення. Роздільна здатність світлового мікроскопа дорівнює 0,25 мкм, так як середня довжина хвилі кванта світла видимого діапазону дорівнює 0,5 мкм, що дозволяє збільшувати зображення в 1500 разів.

В електронному мікроскопі довжина хвилі потоку електронів дорівнює 0,000005 мкм, тому він дозволяє розглядати об'єкти, розміри яких у 100 000 разів менші, і практично досягати збільшень в 1 000 000 разів.

Об'єкт у мікроскопах може висвітлюватись двома основними способами: випромінювання проходить через нього або відбивається. У першому випадку досліджують внутрішню структуру, у другому поверхню об'єкта.

Мікроскопи, в яких використовують різні способи освітлення, значно розрізняються за конструкцією і мають різні назви: просвічують (трансмісійні) - мікроскопи світла, що проходить; мікроскопи відбитого світла - скануючі (растрові).

Найбільш часто в клінічній та експериментальній практиці застосовують світловий мікроскоп, що дозволяє вивчати гістологічні препарати в світлі, що проходить, і світлому полі.

При світловій мікроскопії для досягнення спеціальних ланцюгів застосовують інші методи вивчення і спостереження гістологічного препарату. Ці методи реалізують за допомогою додаткових приставок та пристроїв до звичайних біологічних мікроскопів або за допомогою спеціалізованих мікроскопів.

Широко використовують метод темного поля, коли об'єкт висвітлюється лише косим світлом збоку, тому деталі об'єкта контурно виділяються на темному тлі.

Метод фазового розмаїття передбачає, що об'єкт висвітлюють два промені зі зсунутою на чверть довжиною хвилі фази. Проходячи через об'єкт з різних сторін і додатково зсуваючись по фазі структурами препарату, ці промені в області первинного зображення схрещуються. Внаслідок інтерференції відбувається додавання або віднімання їх амплітуд, що виявляється у сильній зміні яскравості структур об'єкта та сильному підвищенні його зорового розмаїття.

Люмінесцентна (флюоресцентна) мікроскопія заснована на флюоресценції - вимушеному світінні деяких речовин, що входять до складу клітинних і тканинних структур, при освітленні їх променями світла з короткою довжиною хвилі (первинна флюоресценція) або на флюоресценції спеціальних люмінесцентних барвників люмінесценція). При цьому збуджує люмінесценцію світло затримується спеціальним (замикаючим) фільтром окуляра і флюоресценція стає видно у полі зору мікроскопа. Цей метод дозволяє виявляти не тільки невидимі за допомогою інших методів структури клітин і тканин, але й судити про їхній якісний хімічний склад.

Поляризаційна мікроскопія заснована на здатності деяких речовин клітин та тканин обертати площину поляризації світлових променів. Об'єкт висвітлюють поляризованим світлом, що пройшло через поляризаційний фільтр. Перед окуляром ставлять другий поляризаційний фільтр (аналізатор), маючи в своєму розпорядженні його площину поляризації перпендикулярно першому фільтру (поляризатору).Світло не пройде в окуляр, але якщо в площині поля зору знаходяться структури, наприклад, колагенові волокна, здатні обертати площину поляризації світлових променів (що мають анізотропію), їх зображення можна спостерігати. За особливостями зображення поляризаційна мікроскопія нагадує темнопольну.

Зображення реєструють фото - і відеокамерами, у тому числі цифровими, що дозволяють вводити зображення в комп'ютер і обробляти його електронними методами з наступним виведенням на екран монітора або роздруковувати.

При електронній мікроскопії джерело світла замінено джерелом електронів (електронна гармата), за допомогою високої напруги (100 000) розігнаних до великої швидкості. Електрони, що пройшли через виготовлений за особливими методиками препарат, що знаходиться у вакуумі, фокусуються не скляними, а електромагнітними лінзами, що грають роль об'єктива та окуляра, і проектуються на екран, покритий люмінофором. Подібно до екрану телевізора під дією електронів він світиться у видимому діапазоні, дозволяючи бачити збільшені в сотні тисяч разів структури об'єкта. Якщо вузький електронний промінь не проходить через препарат, а послідовно пробігає (сканує) його поверхню, внаслідок чого утворюється тривимірне зображення, то цей різновид електронного мікроскопа називається растровим (скануючим).

У більшості випадків, щоб зробити об'єкт придатним для морфологічного дослідження за допомогою мікроскопа, тканини та органи піддають складній попередній підготовці, в результаті якої одержують цитологічний препарат.

Цитологічний препарат може бути тимчасовим, якщо він служить для одномоментного дослідження і не призначений для тривалого зберігання, та постійним, який роблять з розрахунком на багаторазове повторне вивчення та зберігають невизначений час.

Для якісних досліджень у цитології використовують різні цито- та гістохімічні методи, які дозволяють встановити локалізацію певних речовин або біохімічних процесів у тканинних та клітинних структурах.

Цитохімічні реакції найчастіше проводять на кріостатних (приготовлених за допомогою мікротома, що заморожує), зрізах. Про локалізації досліджуваної речовини судять з відкладення забарвленого продукту реакції. Наприклад, для виявлення в клітинах ДНК та РНК застосовують реактив Фельгену, який дає з нуклеїновими кислотами рожево-фіолетове забарвлення. Глікоген виявляють за допомогою ШІК-реакції (реактив Шиффа та йодна кислота), продукти якої мають яскраво-малинове забарвлення.

Різновидом гістохімічного дослідження є імуногістохімічна методика, принцип якої заснований на специфічній взаємодії мічених антитіл (АТ) з тканинними антигенами (АГ). Для мічення антитіл застосовують люмінесцентні барвники (флюорохроми), а також ферменти (пероксидазу хрону) або електронно-щільні частинки для електронної імуногістохімії (колоїдне золото). При прямому методі мічені антитіла безпосередньо взаємодіють з антигенами, при непрямому методі немічені (перші) антитіла специфічно та взаємодіють з антигенами тканини, мічені (другі) взаємодіють з неміченими (першими) антитілами, які для других антитіл є антигеном, що значно підвищує чутливість.

З інших якісних методів слід згадати про авторадіографію, яка дозволяє вивчати процеси метаболізму в мітках і тканинах за допомогою радіоактивної мітки, включеної до складу біологічного субстрату, використовуваного клітиною. Місце локалізації мітки можна виявити за почорнінням фотоемульсії, якою покривають препарат.

Гібридизацією in situ вивчають локалізацію генів та їхню експресію. За допомогою короткого відрізка міченої нуклеїнової кислоти можна знайти та позначити відповідну їй послідовність нуклеїнових кислот у клітині. Локалізацію мітки, якою судять про локалізації чи експресії досліджуваного гена, зазвичай виявляють радіоавтографічним методом. За допомогою гібридизації можна специфічно виявити дуже малі концентрації речовин, що синтезуються клітиною.

Кількісні методи в гістології необхідні отримання об'єктивних даних про зміни клітинних структур у нормі, в експерименті чи при патології. Основні кількісні показники структурних компонентів клітин і тканин – це морфометричні (число структур та їх геометричні розміри) та денситометричні (що відображають концентрацію, оптичну щільність хімічних речовин у цих структурах) параметри. Для їх виявлення застосовують морфометричні та спектрофотометричні методи.

Морфометричний метод включає сукупність прийомів та методів визначення геометричних характеристик досліджуваних об'єктів. Число структур, їх площі, діаметри, периметри та інші показники вимірюють за допомогою спеціальних морфометричних сіток, курвіметра та методу обчислення вагових співвідношень шляхом зважування. Мікроструктури у світлових мікроскопах вимірюють за допомогою окуляр-мікрометра або морфометричних сіток, що вставляються в окуляр.Також морфометрію проводять за зображеннями об'єктів, що досліджуються, на фотографіях. Морфометричний аналіз останніми роками удосконалили з допомогою застосування комп'ютерних методів. За допомогою цитоспектрофотометрії визначають хімічний склад, концентрацію та кількість різних речовин, що містяться в конкретних структурах клітин та тканин за допомогою спеціальних приладів цитоспектрофотометрів. Вони реєструють спектри поглинання або випромінювання ділянок цитологічного препарату та за їх інтенсивністю судять про кількісний вміст досліджуваних речовин.

• Стан мікроскопії у XVIII столітті
• Методи вичленування зародкових мішків без мацерації тканин сім'япочки
• Методи визначення розмірів фітопатогенних спор грибів
• Методи цитології
• Дані електронної мікроскопії живих клітин та тканин при заморожуванні
• Методи ідентифікації виділених вірусів
• Методи дослідження та вивчення властивостей мікроорганізмів
• Методи діагностики непаразитарних ушкоджень рослин
• Методи контрастування бактерій, виявлення рухливості та спороутворення
• Об'єкти та методи фітопатології